En el área de Autoinmunidad se realizan estudios de autoanticuerpos que son de utilidad en el diagnóstico y seguimiento de enfermedades tanto autoinmunitarias sistémicas como organo-específicas. El área de Autoinmunidad se dedica al diagnóstico de laboratorio de enfermedades autoinmunes mediante el análisis de detección y cuantificación de autoanticuerpos y/o mediadores inmunológicos implicados. La importancia clínica de la presencia de autoanticuerpos puede tener un valor diagnóstico (criterio), pronóstico o de seguimiento terapéutico. Las patologías que incluye se clasifican como:

• Enfermedades endocrinas autoinmunes: Diabetes Mellitus tipo Y, enfermedades Tiroideas, Enfermedad de Addison, Síndrome Poliglandular Autoinmune
• Enfermedades Autoinmunes del riñón: glomerulonefritis membranosa
• Enfermedades Autoinmunes de la piel: enfermedades ampulosas y dermatomiositis
• Enfermedades Autoinmunes hepáticas: Hepatitis Autoinmune, Colangitis Biliar Primaria, Colangitis Esclerosante.
• Enfermedades Autoinmunes gastrointestinales: Enfermedad Inflamatoria Intestinal, Enfermedad Celiaca, Gastritis Autoinmune.
• Enfermedades Autoinmunes del Sistema Nervioso: Síndromes del espectro de la neuritis óptica, Miastenia Grabes, Polineuropatías periféricas autoinmunes, Encefalitis Autoinmunes, Síndromes Neurológicos Paraneoplásicos.
• Enfermedades reumáticas sistémicas: Lupus Eritematoso, Síndrome de Sjogren, Esclerodermia autoinmune, Artritis Reumatoide, Miositis, Enfermedades del Tejido Conectivo, Síndrome Antifosfolipídico.
• Vasculitis Autoinmunes ANCA positivas.

Los equipos y técnicas que dispone el área de Autoinmunidad para dirigir los estudios de enfermedades autoinmunes son:

• Inmunofluorescencia Indirecta sobre células y tejidos: se basa en la detección de autoanticuerpos mediante el microscopio de fluorescencia. La interpretación experta de patrones o estructuras enfrente estructuras celulares o tisulares permite dirigió el estudio de criba hacia diferentes técnicas monoespecíficas. También es el método de confirmación de diferentes tests monoespecíficos de fase sólida.
• Fixed Cell Based Assay (CBA): Estudio de anticuerpos monoespecíficos mediante inmunofluorescencia indirecta utilizando células transfectadas.
• Inmunoensayos en fase sólida con antígenos específicos acendrados o recombinantes por técnicas como ELISA (enzimoinmunoensayos), CLIA (quimioluminiscencia), Inmunoblot (line y dotblots). Estas técnicas se usan tanto por la caracterización como por la cuantificación de autoanticuerpos con el uso de calibradores y controles de referencia acreditados que validen su uso en la práctica clínica.

En el área de Inmunoquímica se realizan las determinaciones de los componentes plasmáticos del sistema inmunitario que participan en la respuesta humoral (inmunoglobulinas G,A, M y subclases de IgG), sistema del complemento, además de marcadores de inflamación (FR, PCR, citocinas o calprotectina).

Estas pruebas son principalmente útiles para el diagnóstico y seguimiento de inmunodeficiencias, enfermedades inflamatorias/inmunomediadas y para el diagnóstico y seguimiento de los pacientes con mieloma múltiple.

Las diferentes técnicas que se usan en el área y las patologías en las cuales es importando su estudio son:

• Inmunofijación: En la caracterización del isotipo de las inmunoglobulinas para el diagnóstico y seguimiento de las gammapatías monoclonales y de las vasculitis asociadas a crioglobulinas
• Isoelectroenfoque: Para el estudio de bandas oligoclonales en el diagnóstico de esclerosis múltiple
• Turbidimetría: cuantificación de inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM IgD y subclases de IgG. Cuantificación de cadenas k y lambda libres. Estudio de proteínas del complemento (C3 y C4) y de la actividad funcional CH50. Para el diagnóstico y seguimiento de inmunodeficiencias, autoinmunidad y enfermedades hematológicas.
• ELISA: monitorización del tratamiento con fármacos biológicos mediante la cuantificación de los niveles de fármacos y de los anticuerpos antifármaco.
• Quimioluminiscencia: cuantificación de mediadores de inflamación como FR, calprotectina e interleucina-6

En el área de Inmunología celular se llevan a cabo el diagnóstico y seguimiento de pacientes con inmunodeficiencias, tanto primarias como secundarias. Estas incluyen las causadas por infecciones, como el VIH, así como las derivadas de tratamientos farmacológicos con fármacos inmunomoduladores y inmunodepleccionantes.

Se utilizan pruebas de fenotipado de subpoblaciones linfocitarias mediante citometría de flujo, incluyendo estudios multiparamétricos que permiten un análisis detallado de un amplio abanico de subpoblaciones minoritarias y marcadores celulares.

Además, disponemos de varias técnicas para evaluar la funcionalidad de las células del sistema inmunitario. Estas técnicas incluyen estudios de proliferación linfocitaria ante mitógenos y antígenos específicos, estudios de funcionalidad fagocitaria, y la medida de la producción de interferón en respuesta a diferentes virus.

En colaboración con la plataforma de citometría de la IGTP, el servicio cuenta con tres citómetros de flujo, capaces de analizar hasta 13 parámetros simultáneos, y un citómetro de espectro completo que permite el análisis de hasta 40 parámetros.

En el área de Inmunoalergias se llevan a cabo una serie de técnicas orientadas a complementar y orientar el diagnóstico de los procesos alérgicos, como por ejemplo las determinaciones de IgE específicas, la valoración de los niveles de triptasa para identificar un cuadro anafiláctico o el estudio de componentes alergénicos intermediando microarrays. También se realizan estudios funcionales para el diagnóstico de hipersensibilidad a fármacos a partir del test de activación de basófilos (TAB) y el test de transformación linfocitaria (TTL).

Los equipos y técnicas de que dispone el área son:

• Determinación de los niveles de IgE específica(quimioluminiscencia).
• Determinación de los niveles de triptasa (quimioluminiscencia).
• Estudio de componentes alergénicos intermediando microarray
• Test de activación de basófilos para estudiar la hipersensibilidad IgE a fármacos.
• Test de proliferación linfocitaria para estudiar la hipersensibilidad retardada a fármacos.

En el área de Histocompatibilidad, se emplean varias técnicas para el estudio de los genes HLA (Antígenos Leucocitarios Humanos). El sistema HLA es uno de los más polimórficos del organismo, y las diferentes versiones de estos genes pueden influir considerablemente en la susceptibilidad a varias patologías, como la celiaquía, la enfermedad de Behcet o la espondilitis anquilosante. Además, el análisis de estos genes y los estudios de compatibilidad son cruciales para el éxito de los trasplantes.

Los equipos y técnicas de que dispone el área son:

• Extracción de ácidos nucleicos (Maxwell® RSC)
• Cuantificación de DNA (NanoDrop)
• Amplificación de DNA (Veriti 96 Well)
• HLA y susceptibilidad a la enfermedad de Behcet por PCR-Real Time (LightCycler® 480)
• HLA y susceptibilidad a la espondilitis anquilosante por PCR-Real Time (LightCycler® 480)
• HLA e hipersensibilidad a la Abacavir por PCR-Real Time (LightCycler® 480)
• HLA y susceptibilidad a la enfermedad celiaca por PCR-SSO (Xponent Luminex)
• HLA y susceptibilidad a otras patologías como la diabetes autoinmune, retinopatías, artritis reumatoide... (LightCycler® 480)
• Estudios familiares para Trasplante de Progenitores Hematopoyéticos por PCR-SSO (Xponent Luminex)

El área de inmunoterapia y monitorización es una de las principales líneas de crecimiento al servicio de Inmunología del Hospital Hermanos Trias. Se trabaja intensamente en el desarrollo y la implementación de varias metodologías para la monitorización de terapias que actúan de manera selectiva sobre el sistema inmunitario.

Actualmente, las pruebas de monitorización que se realizan en la práctica asistencial incluyen dos tipos de estudios:

• Medida de parámetros solubles en suero: Se cuantifican tanto los niveles de fármacos biológicos en suero como los anticuerpos anti-fármaco generados por inmunogenicidad. Aplicaciones:
  • Niveles y detección de Ac contra adalimumab
  • Niveles y detección de Ac contra infliximab
  • Niveles y detección de Ac contra etanercept.
• Medida de parámetros celulares en sangre total: Basado en la citometría de flujo, esta técnica permite mesurar la expresión de diferentes moléculas en la superficie celular (como por ejemplo receptores) o subpoblaciones linfocitarias que se han identificado como biomarcadores para el seguimiento de varios fármacos. Aplicaciones:
  • Reconstitución puesto-rituximab
  • Ocupación del receptor CD49d en el tratamiento con natalizumab
  • Reconstitución puesto-alemtuzumab
  • Subpoblaciones linfocitarias en respuesta a fingolimod
  • Subpoblaciones linfocitarias en respuesta a dimetil fumarat
  • Monitorización puesta-terapia con células PUESTO QUE-T
  • Reconstitución puesto-terapia con células PUESTO QUE-T

Monitorizar estos parámetros es de gran utilidad en la práctica clínica para ajustar el tratamiento. Esto permite optimizar la dosis en pacientes respondedores, evitando efectos secundarios, e identificar las causas de la carencia de respuesta en pacientes no respondedores, como por ejemplo la presencia de anticuerpos contra el fármaco, cosa que podría sugerir un cambio de fármaco o diana terapéutica. El objetivo de la monitorización de terapias biológicas es convertir esta herramienta en una parte clave de la toma de decisiones, aportando beneficios tanto para el paciente como para el clínico.